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流式细胞仪质控微球(上)

越来越多的客户在科研及临床上用到流式细胞仪,有关流式的质控微球咨询也较多,在此统一作简单的介绍。

首先申明的是,在此介绍的质控球,只是机器方面的质控,不包括具体分析的质控微球(如补偿荧光球,流式定量分析定标微球)。

市面上除了流式仪器厂家自己提供的质控微球外,全球主要的流式质控球研发生产厂家有Bangslabs, Spherotech。它们都是由我们(东莞汉诺生物)代理并提供技术支持,有需要的请联系。下面就这两家的质控微球分别作简单介绍。

Bangslabs的流式球源于收购的流式细胞术标准公司 (FCSC),FCSC的创建者 Abe Schwartz 率先开发了用于研究和临床流式细胞术的标准品和校准器,Bangslabs收购该公司后,进一步丰富了其产品线,除了流式细胞仪的质控微球,还推出了细胞活力分析仪、粒子计数器和粒度仪的标准微球。

在日常使用中,我们经常要对流式的荧光通道进行校正,对准,此时就需要用到荧光质控微球,面对众多的荧光球,我们该如何选择?

1 多组多荧光多强度:用英语来表示,一般记为multi-populations, multi-fluo, multi-intensities(Peaks)。可以这样理解,在单个的 8um聚苯乙烯微球上加载了A,B,C,D,E,F,G, 7种荧光,他们的强度分别为 a,b, c, d,e,f,g。多个这样的荧光球,我们可以看成是一个population(组), 一个intensity(峰), 需要注意的是,峰在此针对单个荧光而言。 同理我们在另一 单个的 8um聚苯乙烯微球也加载了A,B,C,D,E,F,G, 7们的强度别为 2a,2b, 2c, 2d,2e,2f,2g。多个这样的荧光球,我们同样看成是一个population, 一个intensity 。如此这样,我们将所有荧光球混合后,可以得到多组多荧光多强度的荧光球。Bangslabs对应的产品是QUANTUM™ QC  peaks, 它是由7种荧光7种强度的荧光球(A管),加一个空白球(B管)组成,在此空白球也算一个荧光强度,所以有8个峰。产品资料如下:

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由此可见,该荧光质控球,几乎覆盖了主流产品的所有通道,可以满足大部份的客户所需。

有的客户会认为,QUANTUM™ QC  8 peaks 太多了,太麻烦了,我用不了这么多的峰,希望简化一下。那么接下来介绍的,可能就是您要的

2  多组单荧光单强度:用英语来表示,一般记为multi-populations, single-fluo, single-intensity(Peak)。可以这样理解,单个8um的聚苯乙烯微球上染单一的荧光A, 荧光强度为a, 多个这样的荧光球构成一个population(组),一个Intensity(峰);同理我们在另一单个8um的聚乙烯微球上染单一的荧光B荧光强度为b, 多个这样的球构成另一个population(,另一个Intensity()。如此这样,我们将多个这样的荧光球混合,就可以得到能质控多个通道的荧光球。Bangsalbs对应的产品是Full Spectrum™ ,故名思义,它选择的荧光种类覆盖了可见光谱,适用于355nm-633nm的流式通道。具体有哪些荧光染料,可联系我们。

还有的客户认为上面产品还是太复杂了,用不了这么多的通道,我平时只用到1-2个通道,比如FITC 和 PE,有没有更简单的,答案是肯定的

3 单组单荧光单强度:可表述为single population, single -fluo, single-intensity.  这种质控球很简单,就是在聚苯乙烯球上加载单一荧光(如FITC或PE), 荧光也不分强弱,直接用于对应的荧光通道的质控,Bangslabs的这类产品是Single-color Fluorescence standard. 详细见下图:

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上面简单介绍了荧光通道的质控微球,下面简单介绍一下流式的粒径质控球。

在用流式进行细胞分析时,会涉及到细胞的大小分析,此时需要对流式细胞仪的前向散射(FSC)进行质控,它是由不同粒径大小的无荧光质控球来完成的。Bangslabs的对应产品为:Size Calibration Standards。它是由5组4-11um的球组成,覆盖了大多数细胞的粒径范围。

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如果您的实验涉及到更小的颗粒分析,如血小板,外泌体等。此时一般的流式就不适用了,需要能分析更小颗粒的仪器,目前市面上已经有不少厂家致力于此。重要的是,Bangslabs仍然可以提供这类仪器的粒径质控微球。对应的产品是Nanobead Calibration Kit, Submicron Calibration kit. 

 

下期我们讲更复杂Spherotech 产品。

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