背景：本 ELISA 检测利用竞争性结合原理来测量植物提取物中的激素浓度。反式玉米素核糖特异性抗体预包被于反应孔表面。将含有未知量激素的植物提取物样品与已知量的示踪剂混合在反应孔中，并与反应孔中有限数量的抗体发生反应。在孵育过程中，样品中的激素与示踪剂竞争抗体结合位点。未结合的激素、示踪剂和植物提取物被从反应孔中洗脱出来。加入底物后，底物与结合于抗体的示踪剂发生反应，生成黄色产物。通过同时处理标准品和样品，绘制标准曲线，将样品的吸光度转化为激素浓度。

反应孔：抗体包被并封闭，5 个用于 480 次测定，60 条带，8 个孔

示踪剂：  20 – 50 µl

示踪稀释剂：  5x250 mM TBS Tris、10 mM NaCl、1 mM MgCl2、pH 7.5 储备液 + 0.02% _NaN3

反应及洗涤液：  10x TBS 原液+0.02% _NaN3

终止试剂：  2x 5 N KOH 溶液

底物稀释剂：  10x 500 mM NaHCO3 原液，pH 9.6+0 0.02 %.0 0.02 % NaN ₃

底物：  100毫克

标准品： 各 600 µl：15.6 pmol、7.8 pmol、3.9 pmol、1.95 pmol、975 fmol、488 fmol、244 fmol、122 fmol、61 fmol、30.5 fmol、15.2 fmol

检测开发时间：  4-5小时

灵敏度：  0.01 至 10 pmol/50 µl

植物提取物体积：  50 µl
 

可以直接分析藻类、细菌和蓝藻的样品，或者在预净化后进行分析。

植物组织提取和纯化示例：
将冷冻的植物组织在液氮下研磨成细粉。将粉末在含有二乙基二硫代氨基甲酸钠（400 ug . g-1 FW）的冰冷70%乙醇（10 ml . g-1 FW）中提取。将约420 Bq（25.000 dpm）的[2- ³ H]生长素示踪剂添加到提取物中，以监测纯化步骤中的损失并验证色谱数据。提取2小时后，将匀浆离心（15 000 g，4°C），并以相同方式重新提取沉淀物。然后将合并的提取物通过反相C18柱纯化，以去除叶绿素和脂质。随后，在35°C下通过真空旋转蒸发将提取物浓缩至约1.0 ml。将样品用含有二乙基二硫代氨基甲酸钠的醋酸铵缓冲液（40 mM，pH 6.5）稀释至 20 ml。对于免疫测定稀释分析，将 2 ml 洗脱液真空干燥并重新溶解在 Tris 缓冲盐水（TBS、50 mM Tris、10 mM NaCl、1 mM MgCl ₂、pH 7.5）中。将这些溶液的等分试样进行连续稀释分析，或与已知量的 IAA 标准混合，然后通过 ELISA 进行分析。使用二乙基氨基乙基纤维素（1.0 x 5.0 cm）-十八烷基硅胶（0.5 x 1.5 cm）组合柱进一步纯化提取物。将 IAA 及其氨基酸代谢物上样到 DEAE 柱芯上，然后用 10 ml 蒸馏水洗涤，并在 5 ml 6% HCOOH（v/v）中洗脱。将洗脱液上样至C18柱，先用5 ml蒸馏水洗涤，再用5 ml甲醇洗脱。洗脱液蒸发至干，溶于50 ul 70%乙醇+250 ul蒸馏水中，经HPLC预滤器（0.22 um）过滤。