计数及浓度标准微球的混匀问题

2025-02-19

随着越来越多的研究涉及到细胞计数，计数微球的使用变得也越来越普遍，现就相关的混匀问题作简单介绍。

重悬和混匀

计数/浓度标准微球可用于细胞计数仪的校准。在仪器的验证、常规 QC 检查和校正、以及人员培训方面都需要用到。校准微球的使用，可以标准化仪器之间，实验室之间的检测条件。

高分子微球因为均一性好，重复性佳，便宜且易于获得，常用于模拟生物颗粒，如细胞，蛋白多聚体等。虽然这类非生物性颗粒的有许多优点，但在具体操作时，仍有许多地方需要注意。

正确的重悬/混匀，取样是仪器校正结果精准可信的重要保证。不适当的混匀或取样会产生双重后果：1）取的样品无法准确代表原装瓶中的浓度，2）原装瓶中微球因混匀不足及多次采样产生浓度迁移，累积误差。

重悬/混匀： 使用前在旋转混匀仪上混合30分钟，然后马上进行取样。如果是小瓶包装（如SingleShot™），体积小，只需要几秒钟的剧烈摇晃就可以了。产品经过长时间的存放后，可能会有颗粒沉淀（常用的聚苯乙烯密度1.05)，此时需要更长时间的混匀，如有必要，还需要超声等。

取样：对于计数/浓度校准，取样体积的误差会影响到校正的结果。为了保证取样的正确，需要对移液器进行日常维护，并定期校准，而且还要对操作人员进行必要的取样培训。

正如上面所说，由于球的密度大于纯水，加上微球的体积较大>2um，因此长时间存放会导致微球沉降，另外，不正确的存放还可能会让微球留驻在瓶盖上，引起浓度误差。为了获得精准的校正结果，使用时以上这些都需充分考虑。

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