MFI和ERF是指什么？

刚好有客户问到流式跨仪器/平台质控的问题，在此想到两个常用的术语MFI与ERF，那么它们分别代表什么呢？

MFI（Mean Fluorescence Intensity），是指测量样本（如细胞、微球）的平均荧光强度，表示样本在特定检测通道中的 相对荧光亮度，单位通常可以是任意荧光单位（a.u.）。它由仪器直接测量（如流式细胞仪的FITC通道检测荧光均值）而得，MFI值的大小与仪器设置（激光功率、增益）、荧光分子的亮度、以及荧光标记的多少有关。

ERF（Equivalent Reference Fluorophores），是指样本的荧光强度相当于多少个标准荧光分子（如FITC、PE染料） 的亮度，是一个绝对的荧光分子定量，与仪器无关。它的意义在于将荧光信号转化为绝对分子数后，可用于跨实验、跨仪器的标准化比较。有时候，ERF也叫ENRF（Equivalent Number of Reference Fluorophores）

从以上定义，我们不难得出以下公式：

ERF=I_sample/I_ref  (I_sample 表示是样本的平均荧光强度MFI, I_ref表示的是单个荧光分子的强度）。

若某微球的 MFI = 10,000（a.u.），而参考荧光素分子的 MFI = 100（a.u.），则 ERF = 100。这意味着该微球的荧光信号相当于 100 个荧光素分子 的亮度。

还有一个参数MESF与ERF内容也差不多，MESF是Molecules of Equivalent Soluble Fluorophore的缩写，讲的是指样本荧光亮度相当于多少个游离/自由荧光分子（在溶液中），有人认为MESF是专指FITC的。例如：若某抗体的流式信号 = 50,000 MESF，表示其亮度相当于 50,000 个自由FITC分子。一般地，二者可以视为相同。

如果这类质控微球中使用的荧光，为NIST荧光标准品，例如Spherotech 的URQP-38-6K，SRQP-38-4K 彩虹质控球，就可称为”NIST可溯源的质控微球“，适用更高要求的流式质控。